효소의 활성 측정(measurement)
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작성일 23-02-08 16:51본문
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2) 준비된 효소액 동량 1 ml을 여러 pH 완충용액 1 ml과 섞는다. 나) 실험 방법
효소,중간,기말,결과,
효소의 활성 측정(measurement)
2) 조교는 각 조별로 실험할 기질을 지정한다 (5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 % H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol).
1) 준비된 카탈라제 효소액 1 ml을 실험 1에서 가장 높은 활성도를 나타낸 pH의 완충용액 1 ml 과 섞는다. 두 용액을 섞은 직후부터 거품이 시험관에 넘치기 직전까지의 시간을 측정(測定) 한다.
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4) 두 가지 용액을 섞자마자 timer로 거품이 시험관을 넘치기 직전까지 시간을 재고 기록한다.
3. Enzyme kinetics analysis
3) buffer solution : 50 mM Na-phosphate solution (pH 4, 5, 6, 7, 8, 9)
4) 기질용액과 효소액을 섞고 지정된 온도에서 반응시킨다.
1. 도구 및 방법 가) 실험 도구 1) sliced potato for catalase extract 2) substrate solution : 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 % H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol * BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다.
1. 도구 및 방법
설명
1) 감자를 강판에 갈아서 거즈로 걸러 카탈라제 효소액을 마련한다.
* BSA (Bovine Serum Albumin, Sigma)을 농도가 1 mg/ml이 되게 만든다. 이때 효소액 역시 지정된 온도에서 5 분간 기질용액과 섞기 전까지 온도를 맞춘다.
4) 얼음, room temperature, 37 oC, 50 oC, 65 oC, boiling water.
2) substrate solution : 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 % H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol
2. 온도 變化(변화)에 따른 효소의 활성도 점검
3) 각 조는 1 ml의 기질용액을 15 ml 시험관에 넣은 후 효소액이 있는 incubator에 5 분간 넣고 기다린다.
5) 15 ml test tube, timer
순서
1) 준비된 효소액 10 ml을 최적의 pH의 완충용액 10 ml과 섞은 후 실험 2에서 알게된 최적의 온도를 나타내는 incubator에 넣고 5 분간 기다린다.
다. 3) buffer solution : 50 mM Na-phosphate solution (pH 4, 5, 6, 7, 8, 9) 4) 얼음, room temperature, 37 oC, 50 oC, 65 oC, boiling water. 5) 15 ml test tube, timer
3) 1 ml의 20% H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol를 준비된 시험관에 넣고 지정된 온도에서 5분간 온도를 맞추기 위해 넣은 후 기다린다.
3) 실온에서 1 ml의 20% H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol를 준비된 시험관에 넣고 timer로 거품이 시험관을 넘치기 직전까지 시간을 재고 기록한다. 조교는 각 조별로 실험할 pH를 지정한다.
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1. pH 變化(변화)에 따른 효소의 활성도 점검
가) experiment(실험) 도구
1) sliced potato for catalase extract
2) 조교는 각 조별로 반응시킬 온도를 정해 준다.